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Peptidkonjugat an Trägerproteine (KLH, BSA und OVA)
Kurze Peptide sind meist zu klein, um eine ausreichende Immunantwort auszulösen. Daher ist es notwendig, das Peptid an ein größeres Trägerprotein zu konjugieren, um eine robuste Immunantwort zu fördern und hohe Mengen spezifischer Antikörper zu erzeugen. Biorunstar bietet die folgenden am häufigsten verwendeten Trägerproteine für Peptidkonjugate:
KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin, MW 4,5 × 10⁵ - 1.3 × 10⁷ Da) ist ein kupferhaltiges Protein, das aus isoliert wurdeMegathura crenulataAufgrund seiner hohen Immunogenität ist es im Allgemeinen das Trägerprotein erster Wahl. An KLH konjugierte Peptide weisen aufgrund der Größe und Struktur des Proteins häufig eine begrenzte Wasserlöslichkeit auf; Dies hat jedoch keinen Einfluss auf die Immunogenität und trübe Lösungen können weiterhin für Immunisierungen verwendet werden.
BSA (Rinderserumalbumin, MW 67 × 10³ Da) ist aufgrund seiner zugänglichen Lysinreste ein beliebtes Trägerprotein für schwach antigene Verbindungen. Da BSA kleiner ist, ist es besser wasser-löslich als KLH und wird häufig in Immunoassays verwendet. Da BSA jedoch häufig zur Blockierung unspezifischer Bindung verwendet wird, sollten BSA-Konjugate nicht zur Immunisierung verwendet werden, wenn das Testsystem BSA verwendet, da dies aufgrund von Antikörpern gegen BSA in den Antiseren zu falsch positiven Ergebnissen führen kann.
OVA (Ovalbumin, MW 45 × 10³ Da) ist ein aus Hühnereiern isoliertes Protein. Es wird üblicherweise als Kontrollträgerprotein verwendet, um zu überprüfen, ob Antikörper spezifisch für das Zielpeptid und nicht für das Trägerprotein (z. B. KLH/BSA) sind.

Im Allgemeinen hängt die Wahl der Konjugationschemie von der bereitgestellten Antigenpeptidsequenz ab.
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Sequenz enthalten/ Reaktionsstelle |
Chemie |
Kommentare |
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Kostenlose -NH2-Gruppe |
Glutaraldehyd |
①Empfehlen Sie N-terminales freies NH2, vermeiden Sie nach Möglichkeit Lys oder einen Pro N--Terminus in der internen Sequenz ②Die Antigenpeptidsequenz stammt aus der C-terminalen oder internen Region des Proteins |
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Kostenlose -COOH-Gruppe |
EDCI |
①Empfehlen Sie C-terminales freies COOH, vermeiden Sie nach Möglichkeit Glu oder Asp in der internen Sequenz ②Die Antigenpeptidsequenz stammt aus der N-terminalen oder internen Region des Proteins |
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Kostenlose -SH-Gruppe |
MBS/SMCC |
Häufig verwendeter Ansatz, normalerweise durch Hinzufügen eines zusätzlichen Cys zur Sequenz entweder am N-- oder C--Terminus |